k-assay KT-7519說明書

Human Apoptosis InducingFactor (AIF) ELISA

誘導(dǎo)人凋亡
因子（AIF）ELISA
用于定量測定血清、血漿中的人類AIF，
組織勻漿和其他生物液體
貨號：KT-7519

預(yù)期用途
該試劑盒是一種夾心酶免疫分析法，用于體外定量測定人體AIF
血清、血漿、組織勻漿和其他生物液體。僅供研究使用。不適用于
診斷程序。

需要但未提供的材料
1.帶450±10 nm濾光片的微孔板閱讀器。
2.單通道或多通道移液管，具有高精度和一次性j端。
3.微量離心管。
4.去離子水或蒸餾水。
5.用于吸干微孔板的吸水紙。
6.洗滌液容器。
7.0.01 mol/L（或1×）磷酸鹽緩沖鹽水（PBS），pH值7.0-7.2。
存儲
所有試劑應(yīng)按照瓶上的標(biāo)簽保存。校準(zhǔn)器、檢測試劑A、，
檢測試劑B和96孔條形板在接收時應(yīng)儲存在-20°C下，而其他試劑則應(yīng)儲存在-20°C下
溫度應(yīng)為4°C。未使用的板條應(yīng)保存在密封袋中，并向其提供干燥劑
盡量減少暴露在潮濕空氣中。打開的測試套件將在1個月內(nèi)保持穩(wěn)定，前提是將其儲存為
如上所述。

測試原理
本試劑盒中提供的微孔板已預(yù)涂有AIF特異性抗體。校準(zhǔn)器
然后，將樣品添加到適當(dāng)?shù)奈⒖装蹇字校⒓尤胍环N特定于
AIF。接下來，將結(jié)合辣根過氧化物酶（HRP）的抗生物素蛋白添加到每個微孔板中，并
孵化。加入TMB底物溶液后，只有那些含有AIF、生物素結(jié)合抗體和酶結(jié)合親和素的孔才會出現(xiàn)顏色變化。酶底物反應(yīng)為
通過添加硫酸溶液終止，并測量顏色變化
在450 nm±10 nm的波長下進(jìn)行分光光度測定。樣品中的AIF濃度為
然后通過將樣品的外徑與校準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較來確定。

樣本收集和儲存
血清
使用血清分離管，讓樣本在室溫下凝結(jié)兩小時，或在室溫下凝結(jié)過夜
在大約1000 x g的條件下離心20分鐘前，溫度為4℃。測定新鮮制備的血清
立即或在-20°C或-80°C下等分儲存樣品，以備日后使用。避免反復(fù)凍融
周期。
等離子體
使用EDTA或肝素作為抗凝劑收集血漿。在1000 x的溫度下離心樣品15分鐘
g在收集后30分鐘內(nèi)，在4°C下。立即清除血漿并進(jìn)行分析，或?qū)悠穬Υ嬖?br/>在-20°C或-80°C下等分供日后使用。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
組織勻漿
組織勻漿的制備取決于組織類型。
1.在冰冷的PBS中沖洗組織，*清除多余的血液，并稱重
均質(zhì)化。
2.將組織切碎成小塊，并在新鮮的溶解緩沖液（不同的溶解緩沖液）中均質(zhì)
需要根據(jù)目標(biāo)蛋白質(zhì)的亞細(xì)胞位置進(jìn)行選擇（w:v=1:20-1:50，例如1毫升裂解
使用冰上玻璃均質(zhì)器（微型組織研磨機）將緩沖液添加到20-50 mg組織樣品中
也很有效）。
3.使用超聲波細(xì)胞破碎機對所得懸浮液進(jìn)行超聲波處理，直到溶液澄清。
4.然后，勻漿在10000×g下離心5分鐘。收集上清液并
立即測定或等分并儲存在≤-20攝氏度。
其他生物液體
以1000 x g離心樣品20分鐘。收集上清液并立即進(jìn)行分析或儲存
在-20°C或-80°C下等分取樣，以備日后使用。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
注:
1.5天內(nèi)使用的樣品可儲存在4°C下，否則樣品必須儲存在-20°C下
(≤1個月）或-80°C(≤2個月）以避免生物活性喪失和污染。
2.樣本溶血會影響結(jié)果，因此不應(yīng)使用溶血樣本。
3.進(jìn)行分析時，將樣品置于室溫。
4.根據(jù)我們的檢測結(jié)果，強烈建議使用血清而不是血漿進(jìn)行檢測
內(nèi)部數(shù)據(jù)

試劑制備
使用前，將所有套件組件和樣品置于室溫（18-25℃）。如果不使用該套件
一次完成后，請只取出當(dāng)前實驗的試紙和試劑，剩下的留著
所需條件下的試紙條和試劑。
校準(zhǔn)器
用1.0 mL校準(zhǔn)液稀釋校準(zhǔn)液，在室溫下保存10分鐘，
輕輕搖動（不要起泡）。儲備溶液中校準(zhǔn)器的濃度為4000 pg/mL。
請先將儲備液稀釋至1000pg/mL，稀釋后的校準(zhǔn)液為最高值
校準(zhǔn)器（1000 pg/mL）。然后準(zhǔn)備7根含有0.5 mL校準(zhǔn)液稀釋液的試管，并使用稀釋液
根據(jù)下圖所示，校準(zhǔn)器產(chǎn)生雙稀釋系列。混合每根管子
在下一次轉(zhuǎn)移前*檢查。設(shè)置7點稀釋校準(zhǔn)器，如1000pg/mL、500pg/mL、，
250 pg/mL、125 pg/mL、62.5 pg/mL、31.2 pg/mL、15.6 pg/mL，以及最后一支帶有校準(zhǔn)器的EP管
稀釋劑為空白，為0 pg/ml。